Vad är skillnaden mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid

De huvudskillnad mellan enkelfördelad plasmid och dubbel digererad plasmid är det enskilda restriktionsenzymer resulterar i en enda digererad plasmid, medan två olika typer av restriktionsenzymer resulterar i en dubbelfördelad plasmid. Vidare kan införandet av det främmande DNA-fragmentet uppträda i båda orienteringarna med enskilda digererade plasmider, medan införandet av det främmande DNA-fragmentet endast sker i korrekt orientering med dubbelfördelade plasmider.

Enplanterad plasmid och dubbelfördelad plasmid är två typer av plasmider som används i den rekombinanta DNA-tekniken för att producera rekombinant DNA.

Viktiga områden som omfattas

1. Vad är en enda digererad plasmid
     - Definition, Self-Ligation, Orientering
2. Vad är en dubbel digererad plasmid
     - Definition, Dubbel Digestion, Orientering
3. Vilka är likheterna mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid
     - Översikt över gemensamma funktioner
4. Vad är skillnaden mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid
     - Jämförelse av viktiga skillnader

Nyckelbegrepp

Dubbel digererad plasmid, dubbel digestion, orientering, rekombinant plasmid, enkel digererad plasmid, enkel digestion

Vad är en enda digererad plasmid

Enkeldigerade plasmider är en typ av plasmider som digereras endast med ett enda restriktionsenzym. Därför kallas denna process enkla matsmältningen. I allmänhet innehåller plasmider som används i rekombinant DNA-teknik endast en enda restriktionsplats för ett visst restriktionsenzym. Därför gör den enkla digestionen den cirkulära plasmiden linjär, vilket ger ett enkelt DNA-fragment. De två ändarna av detta DNA-fragment är kompatibla med varandra; därför kan de genomgå själv-ligering under efterföljande ligering med insatsen. 

Figur 1: Enkelt digererad plasmid

Här måste inlägget också smältas med samma restriktionsenzym för att producera kompatibla ändar med plasmiden. Därför uppstår ligeringen i två möjliga orienteringar: i orienteringen 5 'till 3' och 3 'till 5' orientering. Inläggen med samma orientering som promotorområdet kan emellertid genomgå transkription. Således är denna orientering känd som korrekt orientering. Innan fortsättningen måste de rekombinanta plasmiderna med korrekt orientering väljas genom screening av de transformerade kolonierna, antingen genom PCR eller biokemiska analyser.

Vad är en dubbel digererad plasmid

Dubbel digererade plasmider är plasmiderna som genomgår dubbel digestion med två restriktionsenzymer. Här kan denna reaktion utföras i ett enda rör. Restriktionsställena för båda matsmältningarna sker inom restriktionsigenkänningssiten i plasmiden. Därför resulterar dubbelt digestionsreaktion också i ett enda DNA-fragment. Men var och en av de två ändarna produceras av ett annat restriktionsenzym. Därför är dessa ändar inte kompatibla med varandra och genomgår inte själv-ligering.

Figur 2: Dubbel digererad plasmid

Viktigast är att insatsen kan ligeras i korrekt orientering med dubbel-digererade plasmider genom att smälta ändarna av insatsen för att ligera i rätt orientering. Därför ger dubbelt digererade plasmider endast de rekombinanta plasmiderna med korrekt orientering, vilket gör det efterföljande urvalet av orienteringen onödigt. Detta sparar tid eftersom det reducerar ett komplett steg från den rekombinanta DNA-tillverkningsförfarandet.

Likheter mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid

• Enplanterad plasmid och dubbelfördelad plasmid är två typer av plasmider som används i rekombinant DNA-teknik.
• Både enkel digestion och dubbel digestion kan utföras med en enkelstegsreaktion.
• Också i det båda är det främmande DNA-fragmentet infört mellan de två ändarna av de uppdelade plasmiderna.
• Vidare ger både enkel och dubbel digestion av en plasmid ett enkelt DNA-fragment medan två DNA-fragment uppträder när en rekombinant plasmid digereras.

Skillnad mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid

Definition

Enplanterad plasmid hänför sig till en plasmid digererad av ett enda restriktionsenzym medan dubbelfördelad plasmid hänför sig till en plasmid digererad av två olika restriktionsenzymer. Dessa definitioner förklarar huvudskillnaden mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid.

Ends

I enkeldigade plasmider producerar digestion med samma restriktionsenzym båda ändarna medan i digererade plasmider resulterar digerering med ett annat restriktionsenzym varje ände. Därför är detta en viktig huvudskillnad mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid.

Självligering

Dessutom är självligering en viktig huvudskillnad mellan enkelfördelad plasmid och dubbelfördelad plasmid. Ändarna av enkeldeltade plasmider är kompatibla med varandra för självligering medan ändarna av dubbelfördelade plasmider inte är kompatibla med varandra för självligering.

Betydelse

Vidare kan införande av främmande DNA-fragment förekomma i båda orienteringarna i de enkeldelade plasmiderna medan införandet av främmande DNA-fragment kan utföras i korrekt orientering i de dubbelfördelade plasmiderna.

Typer av rekombinanta plasmider

En enda digererad plasmid kan producera tre typer av plasmider: två rekombinanta plasmider med motsatta orienteringar och en självligerad plasmid utan en insats. Under tiden kan en dubbel-digererad plasmid producera endast en typ av rekombinant plasmid, vilken är i korrekt orientering. Detta är sålunda en annan huvudskillnad mellan enkel digererad plasmid och dubbel digererad plasmid. 

Tids sparande

De rekombinanta fragmenten av enkeldeltade plasmider måste väljas för deras korrekta orientering medan de dubbelfördelade plasmiderna säkerställer korrekt orientering av det främmande DNA-fragmentet. Därför sparar dubbelt digererade plasmider tid i de rekombinanta DNA-teknikerna, inte enskilda digererade plasmider.

Slutsats

Enkelt digererade plasmider digereras med ett enda restriktionsenzym, vilket resulterar i kompatibla ändar med självligering. Dessutom kan deras ligering med det främmande DNA-fragmentet uppträda i båda orienteringarna. Därför måste rekombinanta plasmider med korrekt orientering väljas. Å andra sidan digereras dubbelfördelade plasmider med två olika restriktionsenzymer. Därför är de två ändarna inte kompatibla för självligering. Dessutom kan det främmande DNA-fragmentet ligeras i korrekt orientering med dubbel-digererade plasmider. Därför är huvudskillnaden mellan enkelfördelad plasmid och dubbelfördelad plasmid typ av digestion och inläggets orientering.

Referens:

1. Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. En introduktion till genetisk analys. 7: e upplagan. New York: W. H. Freeman; 2000. Göra rekombinant DNA. Tillgänglig här